上海光學儀器一廠講訴共軛焦顯微鏡操作步驟和方法！
上海光學儀器一廠：
實驗流程：
*.開冷氣，開風扇，開冷卻器。
1.將汞燈打開，將顯微鏡總燈源打開。
2.打開scanner，打開電腦電源。
3.開啟Ar雷射風扇，開啟雷射，He-Ne雷射旋鈕右扳至start即可，Ar雷射開啟方式，要將旋鈕轉到3點鍾方向，再轉回start，而亮燈開啟表示開啟成功。再調整Ar雷射強度，轉至12點鍾，不要調整到max，會使螢光很容易被分解。
4.啟動軟體。
5.將樣品放好，滴上油，調整鏡頭，63/1.32/oil。
6.觀察樣品應注意事項：A.將光路控制桿推入VIS位置。B.將螢光濾鏡調控至1or2or3的位置。(1:UV燈，2.FITC螢光濾鏡，3.rhodamine螢光濾鏡)。C.將tube lens轉到1.0X的位置。D.打開UV燈，推下桿鈕(0的位置)。
7.先以快速上升鈕，調控上升載物臺，再將接近物鏡時，就小心緩慢的調整上升鈕，會發(fā)現(xiàn)綠光會漸漸變暗，等綠光突然變亮，表示鏡頭已經接觸到油滴，此時改轉動細調節(jié)輪�？焖俚爻约旱姆聪蜣D動，轉動后視野紅色會變亮在變暗，此時表快接近目標，在繼續(xù)轉動看到目標為止。(尋找時利用FITC綠色燈激發(fā)，于目鏡中看到紅色的光。利用FITC尋找較快)�？吹胶笳{整視野，至較佳的狀況。
8.將顯微鏡視野轉至電腦，須注意事項：A: 將光路控制桿拉出。B.將螢光濾鏡調控至4的位置。(4:電腦)。C.將tube lens轉到UV scan的位置。D.關上UV燈，推上桿鈕(1的位置)。
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9.操作軟體：
10.選用螢光感測光譜測定，在acquire中，按Beams，光線激發(fā)光(U-FITC-TRITC-1)選取好，按兩下。大多使用user定的，不要去改leica內定的質，如果要自行設定條件及一各專屬的應用檔名，則按save，輸入檔名即可。選取設定的PMT，選取Glow(O):訊號感測超過閥值，會警示與變藍色，其馀為灰階設定。
11.設定和確定基本掃描參數(shù)[obj]>物鏡的倍數(shù)：PL-APO 63x/1.32/oil，[mode]>掃描模式：xyz，[format]>選512*512，[speed]>掃描速度：400Hz，[pinh]>選Airy1，[zoom]選取1，[8/12]選取8 bits。
12.完成上列基本設定后，即可開始執(zhí)行連續(xù)掃描continuous scan，掃描后快速調整PMT感測的gain，以出現(xiàn)一點點藍色為佳，也可以調整Z軸，調整焦距，讓影像更清晰，完按stop。
*.除了PMT及Z-focus調整外，也可以調整雷射強度，光譜感測范圍，或pinhole大小，或改變PMT的offset，調整后，可再按一次continuous scan，及可以儲存影像。如果影像不夠清晰或雜訊太多，則可以在使用average的擷取處理。
13.影像儲存：將游標至于影像中，按右鍵，選sent to>experiment> >影像儲存。再至暫存區(qū)，選取檔案，至file指令中，選取save as。
14.影像average處理：調大 和 的值，2*2或4*4，值越大，越清晰。在按 ，掃完按stop，掃完在影像中按滑鼠右鍵，儲存。
15.在影像調控顯示視窗中，可以選取顯示視窗，如果為ch-3，視窗為(FITC/TRITC/Cy5)，第四個ch顯示區(qū)為3各視區(qū)的overlay。視窗顏色可以選取旁邊的調色帶，來更改顏色。
16.連續(xù)掃描：調整 *1， *1，按 ，調整Z軸，按 ，調整Z軸，按 。按 看厚度，按 選取切片次數(shù)(1.2μm/次)。關掉 ，調整 *2， *2，按 。掃完影像后，可以以play連續(xù)觀看，或 觀看所有影像，或以 選取較好的影像，也可以用旁邊的調色帶調整影像，完成后，在影像中按滑鼠右鍵，儲存。儲存完后選取再按file儲存。（上海光學儀器一廠講訴共軛焦顯微鏡操作步驟和方法！本站網址http://www.cshtwl.com/ 注明）
17.關機：調整Ar雷射左調至min較小處。關閉He-Ne雷射，關閉Ar雷射至off。關閉掃描器電源，結束軟體，關閉電腦電源，Ar雷射電扇不要關，關掉顯微鏡燈源(汞燈，鹵素燈)，關閉顯微鏡總電源開關，擦鏡頭，將鏡頭轉至空鏡頭，關閉實驗室總電源。
